Laboratorio di Biologia Molecolare

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Caratteristiche tecniche: Laboratorio specializzato nello studio della virologia molecolare e della enzimologia virale.

Il Laboratorio è equipaggiato con: 2 Cappe a flusso laminare, 2 Incubatori, 1 Congelatore (-20 °C), 1 Frigo/freezer (+4/-20 °C), 1 PCR Real-Time, 2 PCR classiche, 1 FPLC, 1 Centrifuga, 2 Centrifughe refrigerate, 2 Minicentrifughe, 1 Spettrofotometro, 3 Microscopi, 1 Agitatore orbitale, 1 Ibridatore, Apparati per elettroforesi su gel di acidi nucleici e proteine, 1 Transilluminatore, 1 Termoblock, 1 Bagno termostatato.

Anno di acquisizione: 2004

Responsabile: Dott. Gabriele Giliberti

Inventario: Dipartimento di Scienze e Tecnologie Biomediche – Sezione di Microbiologia e Virologia Generale e Biotecnologie Microbiche

Principali applicazioni:

♦ Un saggio accurato e sensibile di Alu-LTR real-time nested PCR è impiegato per quantificare il DNA di HIV-1 integrato nelle cellule infette. In parallelo si impiegano altri due saggi quantitativi di real time PCR al fine di monitorare il DNA totale di HIV-1 e le molecole circolari di HIV-1 2-LTR durante il processo di replicazione virale.

♦ Estrazione di acidi nucleici, RT-PCR e PCR per l’amplificazione e sequenziamento di virus wild type e farmaco-resistenti per l’identificazione delle mutazioni coinvolte nell’acquisizione della farmaco-resistenza nei confronti di inibitori nucleosidici e non-nucleosidici di HIV-1 e di altri virus con genoma ad RNA.

♦ Clonaggio ed espressione in Escherichia coli di geni virali codificanti enzimi bersaglio per la chemioterapia antivirale selettiva: trascrittasi inversa e integrasi di HIV-1, proteasi, RNA polimerasi, elicasi, metil-transferasi, enzimi preposti al processo di capping, NTPasi.

♦ Clonaggio e mutagenesi sito-diretta di geni codificanti enzimi bersaglio, al fine di identificare il ruolo di siti potenzialmente coinvolti nella farmaco-resistenza.

♦ Espressione e purificazione di enzimi virali wild type e mutati da impiegare in saggi in vitro con inibitori della replicazione virale.